Kit de transcripció d'alt rendiment T7

 

Nom del producte	Cat.No.	Espec.
Kit de transcripció d'alt rendiment T7	G3021-50T	50 T

 

 

El kit de transcripció d'alt rendiment T7 és un sistema complet per a la síntesi eficient d'ARN per a sondes d'hibridació in situ, assajos de protecció de ribonucleases, modificacions post-transcripcionals, incloent l'empalmament i la poliadenilació d'ARN, i per a la traducció in vitro. L'ARN polimerasa T7 és molt específica per al seu propi promotor i transcriurà grans quantitats d'ARN a partir de seqüències d'ADN (per exemple, plasmidis, fragments de reacció en cadena de la polimerasa (PCR) o ADN sintètic) aigües avall del seu promotor,

En el sistema de reacció, 1 ug d'entrada de plantilla pot produir més de 100 ug d'ARN, que és adequat per a la preparació de diverses longituds d'ARN.

 

 

 

Vaixell amb gel humit; Botiga a -20 grau , vàlid durant 12 mesos.

 

 

Número de component	Component	G3021-50T
G3021-1	Barreja d'enzims de transcripció d'ARN T7	200 μL
G3021-2	Tampó de reacció de transcripció 5×T7	250 μL
G3021-3	Mescla NTP de 25 mM	100 μL
G3021-4	DNasa I	50 μL
G3021-5	Aigua lliure de nucleases	1 ml
G3021-6	Plantilla de control (0,5 ug/μL)	10 μL
Manual		Una còpia

 

 

1. Preparació de la plantilla:

a. Plàsmidi que conté el promotor T7: per obtenir ARN d'una longitud específica, el plasmidi s'ha de linealitzar completament i purificar com a plantilla. La linealització del plasmidi amb un enzim de restricció hauria de produir un voladís de 5' o un extrem rom (evitar l'extrem que sobresurt de 3'). La quantitat recomanada de plantilla per reacció és ~1 ug;

b. El producte de la PCR o l'ADN sintètic: l'extrem 5' de l'encebador de la cadena no codificant fusionat amb la seqüència del promotor T7 (5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3') realitza l'amplificació per PCR. Els productes de PCR es poden s'utilitza directament com a plantilles de transcripció sense purificació, però el rendiment d'ARN augmentarà després de la purificació. La quantitat recomanada de plantilla per reacció és de ~0,5 ug.

2. Reacció de traducció in vitro:

a. Afegiu el següent component en un tub estèril i lliure de nucleases sobre gel en l'ordre indicat

b. Barrejar suaument i centrifugar breument.

c. Incubar a 37 graus durant 2 h. (Ajusteu el temps de reacció en funció de la longitud objectiu i del rendiment d'ARN desitjat. Per exemple, ARN inferior a 300 nt, es recomana incubar durant 4 h o més).

Component	Import	Conc. final.
Plantilla	0.5-1 pg	25-50 µg/mL
Tampó de reacció de transcripció 5×T7	4 μL	1×
Mescla NTP de 25 mM	2 μL	2,5 mM
Barreja d'enzims de transcripció d'ARN T7	4 μL
Aigua lliure de nucleases	Fins a 20 μL	--

3. Tractament DNasa I

Després de la reacció, afegir 1 μL de DNasa I, barrejar breument i incubar a 37 graus durant 15 minuts.

4. Quantificació dels productes de transcripció

a. Anàlisi d'electroforesi en gel

Es recomana gel desnaturalitzant de formaldehid agarosa a l'1%.

b. Mètode d'absorció UV

La concentració de productes d'ARN determinada pels equips d'absorció UV després de la purificació (els nucleòtids lliures afectaran la precisió de la quantificació).

 

 

1. Si us plau, utilitzeu guants i màscares adequats i utilitzeu consumibles d'un sol ús sense RNases per evitar la contaminació amb RNases.

2. Per preparar l'ARN marcat, substituïu la barreja NTP del kit pel reactiu adequat.

3. La longitud de transcripció de la plantilla de control del kit era de 500 nt.

4. Per a la vostra seguretat i salut, feu servir ulleres de seguretat, guants o roba protectora.

 

Només per a ús de recerca!

 

 

Etiquetes populars: kit de transcripció d'alt rendiment t7, fabricants de kits de transcripció d'alt rendiment de la Xina t7, proveïdors, fàbrica