Perles magnètiques d'agarosa SweMagrose IDA-Co per a la purificació de proteïnes His-Tag

 

Nom del producte	gat. No.	Especificació.
Perles magnètiques d'agarosa SweMagrose IDA-Co per a la purificació de proteïnes His-Tag	G3655-1ML	1 ml
	G3655-5ML	5 ml

 

 

Aquest producte es prepara a partir de perles magnètiques d'agarosa modificades per IDA i ions quelants de níquel. Pot purificar de manera eficient i ràpida les proteïnes marcades amb histidina en mostres biològiques sense filtració centrífuga. El funcionament és senzill i adequat per a la purificació de proteïnes d'etiqueta d'histidina solubles expressades en el sobrenedant o cèl·lules de bacteris, llevats i cèl·lules. També es pot combinar amb equips de purificació de proteïnes d'alt rendiment per a la selecció i separació de proteïnes.

Co2+ té 4 lligands i menys adsorció inespecífica, Ni2+ té 6 lligands i una forta capacitat d'unió a proteïnes, per obtenir més proteïnes diana, podeu triar les nostres altres perles magnètiques d'agarosa SweMagrose IDA-Ni per a la seva -Etiqueta Purificació de proteïnes (G3654).

 

 

Vaixell amb gel humit; Emmagatzemar a 4 graus, vàlid durant 12 mesos.

 

 

Número de component	Component	G3655-1ML	G3655-5ML
G3655	Perles magnètiques d'agarosa SweMagrose IDA-Co per a la purificació de proteïnes His-Tag	1 ml	5 ml
Manual		1 unitat

 

 

1. La configuració de diversos reactius es pot referir de la següent manera. Els usuaris poden triar la quantitat adequada de perles magnètiques i fórmula tampó segons la situació dels reactius.

Component	Volum
10 × PBS (200 mM de fosfat de sodi, pH 7,4)	50 ml
10x tampó d'imidazol (200 mM de fosfat de sodi, 5 M d'imidazol, pH 7,4)	50 ml
Eliminador de cobalt (10 mM Tris-HCl, 500 mM NaCl, 100 mM EDTA, pH 7,4)	10 ml
Solució de rentat alcalina (0,5 M NaOH, 2 M NaCl)	10 ml
href="javascript:;" Sulfat de cobalt (100 mM CoSO4)	15 ml
Solució de conservació (20% etanol)	50 ml

 

2. Configuració del buffer

El rendiment d'unió de la proteïna objectiu amb comptes quelants d'ions metàl·lics afectarà directament l'eficiència de purificació de la proteïna objectiu, i diversos tampons també afectaran la recuperació i la puresa de la proteïna objectiu fins a cert punt. Per tant, abans de la purificació de proteïnes a gran escala, els usuaris haurien de dissenyar els seus propis experiments per seleccionar els tampons adequats per a la proteïna objectiu, incloent el tampó d'unió, el tampó de rentat i el tampó d'elució. per a la referència dels usuaris.:

Tampó d'unió: fosfat de sodi 20 mM, NaCl 500 mM, imidazol 5 ~ 50 mM, pH 7,4

Tampó de rentat: fosfat de sodi 20 mM, NaCl 500 mM, imidazol 50 ~ 100 mM, pH 7,4

Tampó d'elució: fosfat de sodi 20 mM, NaCl 500 mM, imidazol 500 mM, pH 7,4

3. Tractament de la mostra

a) E. coli, llevat i altres proteïnes expressades intracel·lularment: afegiu 5 ~ 10 ml de tampó d'unió per gram de cèl·lules, afegiu inhibidor de proteasa (per exemple, PMSF a una concentració final d'1 mM), resuspengueu les cèl·lules i liseu ultrasònicament el cèl·lules en un bany de gel, és a dir, la mostra de proteïna bruta. Si la mostra és massa viscosa, es pot afegir una quantitat adequada de nucleasa a la mostra crua segons sigui necessari i col·locar-la sobre gel durant 30 min per degradar els àcids nucleics. Alternativament, es pot realitzar la centrifugació de la mostra de proteïnes segons sigui necessari.

b) Proteïna expressada extracel·lular: la mostra de proteïna bruta es va obtenir quan el sobrenedant d'expressió extracel·lular es va diluir amb una quantitat igual de Binding Buffer.

c) Proteïnes expressades intracel·lularment a les cèl·lules animals: agafeu la quantitat adequada de cèl·lules animals, renteu-vos amb una quantitat adequada de PBS (proporcionat per si mateix) una vegada, descarteu el sobrenedant, torneu a suspendre amb la quantitat adequada de Binding Buffer que conté 1% (v/v) de Tritó X. -100 o 1% (v/v) NP-40, afegiu un inhibidor de la proteasa (per exemple, PMSF a una concentració final d'1 mM) i poseu-lo al gel durant 10 min, és a dir, una mostra de proteïna bruta.

4. Unió de la proteïna diana a les perles magnètiques:

a) Suspengueu 2 g de pes humit dels organismes amb 10 ml de tampó d'unió i, després de la fragmentació i la lisi, s'afegeix una mostra de la proteïna bruta objectiu a un tub de centrífuga que conté perles magnètiques pretractades i el tub es col·loca en un mesclador vortex i agitat durant 15 s. A continuació, s'afegeix la mostra de proteïna bruta objectiu a un tub de centrífuga amb perles magnètiques pretractades.

b) Col·loqueu el tub de centrífuga en una batedora rotativa durant 20-30 min a temperatura ambient (si cal, podeu girar i barrejar durant 1 h a una temperatura baixa de 2-8 graus per evitar la degradació de la proteïna objectiu) .

c) Col·loqueu el tub de centrífuga al separador magnètic per a la separació, transferiu el sobrenedant a un nou tub de centrífuga per a les proves posteriors i traieu el tub de centrífuga del separador magnètic per als passos de rentat posteriors.

5. Rentat de comptes magnètics:

a) Afegiu 10 ml de tampó de rentat al tub de la centrífuga que conté les perles magnètiques, gireu suaument el tub diverses vegades per resuspendre les perles, separeu-les magnèticament i transferiu la solució de rentat a un nou tub de centrífuga per al mostreig. Repetiu aquest procediment una vegada.

b) Afegiu 10 ml de tampó de rentat al tub de centrífuga que conté perles magnètiques per resuspendre les perles, transferiu la suspensió de perles a un nou tub de centrífuga (per evitar la contaminació de les proteïnes diana per proteïnes adsorbides no específicament a la paret del tub de centrífuga original). ), separeu magnèticament i pipeteu el sobrenedant al tub de recollida de tampó de rentat.

6. Elució de proteïnes diana

a) Els usuaris poden ajustar la concentració de proteïna objectiu canviant el volum d'elució segons sigui necessari. Afegiu 2-10 ml de tampó d'elució, gireu suaument el tub diverses vegades per suspendre les perles, separeu-les magnèticament i recolliu l'eluït en un nou tub de centrífuga, que és la mostra de proteïna objectiu purificada.

a) Si cal, repetiu els passos anteriors una vegada per recollir la mostra en un tub de centrífuga nou per comprovar si la proteïna diana s'elueix completament.

b) Detecteu la proteïna diana mitjançant SDS-PAGE o Western blotting. Si necessiteu mesurar la concentració de proteïnes, podeu utilitzar el tampó d'elució per zero la concentració, o utilitzar diàlisi o ultrafiltració per eliminar l'imidazol i després mesurar la concentració.

7. Postprocessament de perles magnètiques

a) Afegiu 5 ml de tampó d'elució al tub de centrífuga que conté les perles magnètiques, gireu el tub amunt i avall diverses vegades per suspendre les perles, separar-les magnèticament i eliminar el sobrenedant.

b) Repetiu els passos anteriors dues vegades.

c) Afegiu 5 ml de ddH O al tub de centrífuga que conté les perles magnètiques, gireu el tub amunt i avall diverses vegades per suspendre les perles, separar-les magnèticament i eliminar el sobrenedant.

d) Repetiu els passos anteriors dues vegades.

e) Afegiu la solució de conservació a les perles magnètiques per obtenir un volum total de 5 ml, emmagatzemeu-la a 2-30 grau (per a l'emmagatzematge a llarg termini, col·loqueu-la a 2-8 grau) i es pot utilitzar per a següent purificació de la mateixa proteïna.

8. Regeneració de perles magnètiques

Quan les perles magnètiques s'utilitzen contínuament 3 o més vegades, la capacitat d'unir proteïnes diana es pot reduir significativament i es recomana dur a terme el procés de regeneració de les perles magnètiques. Preneu 5 ml de suspensió de perles magnètiques al 10% (v/v) com a exemple per il·lustrar l'operació de regeneració de perles magnètiques en detall.

a) La suspensió de perles magnètiques es va separar magnèticament, traieu el sobrenedant i traieu el tub de centrífuga del separador magnètic, afegiu 5 ml de ddH2O al tub de centrífuga i gireu el tub de centrífuga cap amunt i cap avall diverses vegades per tornar a suspendre les perles magnètiques. , se separa magnèticament i elimina el sobrenedant.

b) Afegiu 5 ml d'eliminador de cobalt, gireu el tub de centrífuga diverses vegades amunt i avall per resuspendre les perles magnètiques, girar i barrejar durant 5 min a temperatura ambient, separar magnèticament i eliminar el sobrenedant. Repetiu aquest pas una vegada.

c) Afegiu 5 ml de ddH2O al tub de centrífuga que conté les perles magnètiques, gireu el tub amunt i avall diverses vegades per suspendre les perles, separar-les magnèticament i eliminar el sobrenedant.

d) Tractament alcalí (pas opcional): afegiu 5 ml de tampó de rentat alcalí, gireu el tub de centrífuga diverses vegades amunt i avall per tornar a suspendre les perles, girar i barrejar durant 5 min a temperatura ambient, separar magnèticament i eliminar el sobrenedant. Afegiu 5 ml de ddH2O, gireu el tub de centrífuga cap amunt i cap avall diverses vegades per tornar a suspendre les perles, separeu magnèticament i elimineu el sobrenedant. Repetiu el pas de rentat ddH2O 3-5 vegades fins que la solució de rentat sigui neutra.

e) Afegiu 5 ml de clorur de níquel, gireu el tub de centrífuga diverses vegades cap amunt i cap avall per tornar a suspendre les perles, girar i barrejar durant 20 min a temperatura ambient, separar magnèticament i eliminar el sobrenedant.

f) Afegiu 5 ml de ddH2O i gireu el tub de la centrífuga diverses vegades cap amunt i cap avall per tornar a suspendre les perles, separar magnèticament i eliminar el sobrenedant. Repetiu aquest pas 4 vegades.

g) Afegiu la solució de conservació a les perles magnètiques per fer un volum total de 5 ml i emmagatzemeu-la a 2-30 grau (per a un emmagatzematge a llarg termini, col·loqueu-la a 2-8 grau).

 

 

1. Aquest producte s'emmagatzema en etanol al 20% i s'ha de substituir abans d'utilitzar-lo.

2. No congeleu ni assequeu les perles, ja que això pot afectar l'ús final.

3. Utilitzeu-lo amb un marc magnètic a joc.

 

Només per a ús d'investigació. No s'utilitza en procediments diagnòstics o terapèutics!

 

 

Etiquetes populars: Perles d'agarosa magnètica swemagrose ida-co per a la purificació de proteïnes de la seva etiqueta, Xina swemagrose ida-co perles d'agarosa magnètica per a la purificació de proteïnes de la seva etiqueta fabricants, proveïdors, fàbrica